Millipore 提供了一種用于核酸應用轉印膜選擇。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉印膜可以在 Southern blotting,Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實(shí)驗中獲得出色的結果。 Immobilon-NC 轉印膜,是主要的 Southern 和 colony/plaque 實(shí)驗方案中zui初使用的膜,也可作為一種靈敏度較低但更經(jīng)濟的選擇。
Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉印膜,非常適合于可靠與可重現的轉移、固定、雜交及隨后的重復雜交實(shí)驗。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到zui高的靈敏度和zui低的背景信號。 此膜經(jīng)強化處理具有超長(cháng)的耐久性,這一點(diǎn)對于重復雜交試驗至關(guān)重要。
可提供詳細的實(shí)驗方案,在使用 Immobilon-Ny+ 轉印膜時(shí)可用于優(yōu)化轉印結果。
Southern Blotting
直接比較三種帶正電尼龍膜在各自?xún)?yōu)化實(shí)驗方案下的表現:每種膜在其推薦的紫外波長(cháng)照射下交聯(lián)。 Immobilon-Ny+ 轉印膜的雜交信號是其它兩種膜的 2 倍。
12 次重復雜交之后的信號強度
尼龍膜在 254 nm 交聯(lián),并進(jìn)行了多次重復雜交,依次為:用 32P 標記探針做 2 次雜交,4 次模擬雜交,用 32P 標記探針做第 7 次雜交,然后進(jìn)行 5 次模擬雜交以及用 32P 標記探針做第 13 次雜交。 在每個(gè)雜交周期之間,將膜置于 0.4M NaOH 溶液中,在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實(shí)雜交*一樣,區別在于未加 32P 標記探針。 在整個(gè)重復雜交過(guò)程中,Immobilon-Ny+ 的信號強度是競爭產(chǎn)品 A 和 B 的兩倍。
檢測靈敏度
將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane(條帶)中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對應。 大約相當于 10 µg 人類(lèi)基因組 DNA 中一個(gè)單拷貝基因序列。 可通過(guò)對探針濃度加倍來(lái)提高靈敏度。 在 0.01 ng 條帶中,與競爭產(chǎn)品 A 相比,Immobilon-Ny+ 轉印膜靈敏度稍高,而背景信號更低。
用化學(xué)發(fā)光檢測進(jìn)行 Northern Blotting
鼠肝的全部 RNA (1 µg) 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離,然后通過(guò)毛細作用轉印到 Immobilon-Ny+ 轉印膜和競爭產(chǎn)品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比,通過(guò)紫外交聯(lián)固定RNA 能增強信號。 Immobilon-Ny+ 轉印膜比競爭產(chǎn)品 A 表現出更高的靈敏度。
Colony Lifts
將載有 pUC19 或 pLH2(2.0 kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合細菌懸浮液置于瓊脂培養皿中,在 37°C 下培養過(guò)夜。 將培養皿在 4°C 下冷卻30 分鐘,將菌落(直徑大約 1– 2 mm)轉印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上,或轉印至競爭產(chǎn)品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在 254 nm, 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下 交聯(lián)。 然后用 a 32P 標記的 DNA 探針對膜進(jìn)行雜交,并使用磷屏成像系統顯色。
Immobilon-NC 轉印膜是一種經(jīng)濟型選擇,用于核酸和蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗方案。 這種轉印膜是 Southern、colony/plaque 以及蛋白質(zhì)實(shí)驗方案中zui初使用的膜。 NC HATF 所含的混合纖維素酯基質(zhì),不含在細胞生長(cháng)過(guò)程中會(huì )干擾細胞壁完整性的表面活性劑。 這些膜用于 colony lifts。 NC HAHY 所含的混合纖維素酯基質(zhì),所帶的表面活性劑能夠增強可濕性以及轉印過(guò)程中的處理能力。 兩種膜對核酸和蛋白質(zhì)都具有高吸附容量。 適用于常規轉印。
訂購信息:
比較 | 目錄編號 | 濾膜直徑,mm | 數量/包裝 | |
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INYC08250 | 82 | 50 | ||
INYC08550 | 85 | 50 | ||
INYC13250 | 132 | 50 | ||
INYC13750 | 137 | 50 |
比較 | 目錄編號 | 濾膜直徑,mm | 數量/包裝 | |
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HATF08250 | 82 | 50 | ||
HATF08550 | 85 | 50 | ||
HATF13250 | 132 | 50 | ||
HATF13750 | 137 | 50 |
目錄編號 | 濾膜直徑,mm | 數量/包裝 | ||
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HAHY08250 | 82 | 50 | ||
HAHY08550 | 85 | 50 | ||
HAHY13750 | 137 | 50 |
比較 | 目錄編號 | 濾膜尺寸,cm x cm | 數量/包裝 | |
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INYC61150 | 6 x 11 | 50 | ||
INYC09120 | 9 x 12 | 10 | ||
INYC10100 | 10 x 10 | 10 | ||
INYC15150 | 15 x 15 | 10 | ||
INYC20200 | 20 x 20 | 10 | ||
INYC22220 | 22.2 x 22.2 | 10 | ||
INYC2222C | 22.2 x 22.2 | 100 | ||
INYC26260 | 26 x 26 | 10 | ||
INYC00010 | 30 x 330 | 1 |
比較 | 目錄編號 | 濾膜尺寸,cm x cm | 數量/包裝 | |
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HAHY304F0 | 30 x 30 | 10 | ||
HATF00010 | 33 x 300 | 1 |
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